| 环亚酰胺水解酶在大肠杆菌中的重组表达与纯化 |
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| 引用本文： | 史鹏,张学尧,王丽丽,石亚伟.环亚酰胺水解酶在大肠杆菌中的重组表达与纯化[J].山西大学学报(自然科学版),2008,31(2):252-257. |
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| 作者姓名： | 史鹏 张学尧 王丽丽 石亚伟 |
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| 作者单位： | 教育部化学生物学与分子工程重点实验室,山西大学,生物技术研究所,山西,太原,030006 |
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| 基金项目： | 山西省自然科学基金
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山西省高等学校科研开发基金 |
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| 摘 要： | 以重组质粒pEI为模板,PCR扩增环亚酰胺酶基因序列,插入pMAL-s表达载体中.重组质粒转入E.Coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导可溶性表达融合蛋白MBP-CIH,利用Amylose亲和柱一步纯化获得MBP-CIH,再经人鼻病毒3C蛋白酶切除亲和臂MBP,硫酸铵沉淀、Phenyl-Sepharose疏水层析获得电泳纯的CIH,纯化倍数为12.7,活力回收29%,比活为36.3 U/mg.重组环亚酰胺水解酶的最适pH为8.0～9.0,最适温度50 ℃,在温度低于55 ℃时酶的性质相对稳定.Ni2 、Co2 能显著提高酶活力,Mn2 、Ca2 和Mg2 对酶活没明显有影响,Cu2 、Zn2 、Cd2 、Fe2 以及金属螯合剂8-羟基喹啉、EDTA则对酶有不同程度的抑制作用.初步说明该酶是一个金属依赖性酶.
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| 关 键 词： | 环亚酰胺水解酶 亲和层析 人鼻病毒3C蛋白酶 疏水层析 酰胺水解酶 大肠杆菌 重组 表达与纯化 Hydrolase Cyclic Purification Expression 依赖性 抑制作用 程度 EDTA 羟基喹啉 螯合剂 金属 影响 酶活力 稳定 酶的性质 最适温度 |
| 文章编号： | 0253-2395(2008)02-0252-06 |
| 修稿时间： | 2007年6月14日 |
Expression and Purification of Cyclic Imide Hydrolase in E.coli |
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| SHI Peng,ZHANG Xue-yao,WANG Li-li,SHI Ya-wei.Expression and Purification of Cyclic Imide Hydrolase in E.coli[J].Journal of Shanxi University (Natural Science Edition),2008,31(2):252-257. |
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| Authors: | SHI Peng ZHANG Xue-yao WANG Li-li SHI Ya-wei |
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