| HCV非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 韩佩君,雷迎峰,吕欣,杨敬,姚敏,乔卿华,党品香,尹文. HCV非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达[J]. 科学技术与工程, 2013, 13(36) |
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| 作者姓名： | 韩佩君 雷迎峰 吕欣 杨敬 姚敏 乔卿华 党品香 尹文 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部,第四军医大学基础医学部 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（面上项目，重点项目，重大项目） |
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| 摘 要： | 通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。
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| 关 键 词： | HCV NS3-5B蛋白 真核表达 |
| 收稿时间： | 2013-07-25 |
| 修稿时间： | 2013-07-25 |
Construction of the eukaryotic expression vector of HCV NS3-5B and its expression in BHK-21 cells |
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| Han Pei-jun,Lei Ying-feng,Lv Xin,Yang Jing,Yao Min,Qiao Qing-hu,Dang Pin-xiang and Yin Wen. Construction of the eukaryotic expression vector of HCV NS3-5B and its expression in BHK-21 cells[J]. Science Technology and Engineering, 2013, 13(36) |
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| Authors: | Han Pei-jun Lei Ying-feng Lv Xin Yang Jing Yao Min Qiao Qing-hu Dang Pin-xiang Yin Wen |
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| Abstract: | To construct the recombinant plasmid pIRES2-EGFP-NS3-5B, HCV NS3-5b gene was amplified by the polymerase chain reaction (PCR) and cloned into the eukaryotic expression plasmid pIRES2-EGFP. Then the recombinant plasmid was transfected into BHK-21 cells by Lipofectamine2000 and the expression of target genes were identified by fluorescence imaging and western blot analysis. The results showed that the plasmid pIRES2-EGFP-NS3-5b was successfully constructed and NS3/4A and NS5B proteins were specifically expressed in the eukaryotic cells. It provides the basis for the establishment of a cell-based HCV RdRp evaluation system and animal models development. |
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| Keywords: | HCV NS3-5B proteins eukaryotic expression |
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