| 酶活性及酶反应动力学分析 |
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| 引用本文： | 岑咏一,刘震,李旭锋,杨毅.酶活性及酶反应动力学分析[J].四川大学学报(自然科学版),2016,53(1):169-174. |
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| 作者姓名： | 岑咏一 刘震 李旭锋 杨毅 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31171586） |
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| 摘 要： | 运用PCR扩增获得了属于尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(UGT)家族UGT75B1、UGT71B6、UGT71C5的cDNA序列, 构建了三种基因的GST融合表达载体, 使用大肠杆菌对三种基因进行原核表达, 从裂解液上清中获得具有活性的目的蛋白.分别以ABA、对氨基苯甲酸作为反应底物, 通过高效液相色谱法, 测定三种蛋白的酶活力.结果发现除了UGT75B1对对氨基苯甲酸表现出很高的活性以外, 另外两种蛋白仅表现出了低水平的活性.三种蛋白对ABA都表现出了活性, UGT71B6具有最高的酶活力.对UGT75B1、UGT71B6、UGT71C5三种蛋白对ABA的作用进行了体外酶反应动力学分析, 测定出它们的Km值分别为: 0.73、0.43和0.45mM.以上结果说明UGT75B1对对氨基苯甲酸的活性明显高于ABA, 对氨基苯甲酸是其专一底物.UGT71B6和UGT71C5对ABA都有较高的活性, 两者Km值差距不大.
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| 关 键 词： | 高效液相色谱(HPLC) 拟南芥 尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT) 糖基转移酶 |
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