转甲状腺素蛋白基在毕赤氏酵母中的非融合表达 |
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作者姓名: | 翟杰 高卜渝 等 |
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作者单位: | 复旦大学生命科学院,上海200433 |
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摘 要: | 用限制酶将pSK-TTR质粒上TTR基因切下,分别插入分泌型载体pPIC9和pPIC9K,将重组的pPIC9K-TTR用BglⅡ酶切后,转化pichia pastoris GS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子,转化子经摇瓶发酵,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rTTR表达,经DEAE-sepharose F.F.离子交换柱和Superdex75分子筛层析,得到蛋白线纯度大于95%的rTTR,经Western Boltting,分子质量和等电点测定等证明,毕赤氏酵母的表达rTTR与人血浆提取的TTR极为相似。
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关 键 词: | 转甲状腺素蛋白基因 分泌型载体 毕赤氏酵母 蛋白质印迹 |
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