人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化 |
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引用本文: | 华子春,孙爱龙,王少雄.人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化[J].南京大学学报(自然科学版),1998(2). |
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作者姓名: | 华子春 孙爱龙 王少雄 |
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作者单位: | 南京大学生物化学系,南京大学强化部 |
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摘 要: | 将插入pBluescribe的人红细胞生成素受体cDNA,用EcoRI和BamHI酶解,分离得到的基因片段,插入到经EcoRI和RamHI消解的表达载体pGEX-3X中,得到重组表达质粒pGEX-3X/hEPOR。重组质粒pGEX-3X/hEPOR含有tac启动子,EPOR膜外结构域基因5端与谷胱甘肽转移酶(GST)编码基因融合,阳性重组子在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-hEPOR,重组表达菌裂解上清液经GSH-Sepharose4B亲和柱一步纯化,能除去绝大部分杂蛋白,基本达到纯化的效果。SDS-PAGE和免疫杂交分析显示,重组表达产物确系人红细胞生成素受体
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关 键 词: | 人红细胞生成素受体,融合表达,大肠杆菌,受体 |
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