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凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞茵LexA蛋白与其靶位点的特异性结合
引用本文:陈炫,汤绍辉,唐晖,查庆兵,刘芳.凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞茵LexA蛋白与其靶位点的特异性结合[J].暨南大学学报,2008,29(4).
作者姓名:陈炫  汤绍辉  唐晖  查庆兵  刘芳
基金项目:广东省医学技术科研基金
摘    要:目的:分析铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginoso,,PA)的LesA与其靶位点的特异性结合的特性.方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b( ),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性.结果:构建了pET22b-LexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%,获得纯度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合.结论:推定Lex4结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点.

关 键 词:铜绿假单胞菌  SOS反应  阻遏蛋白(LexA)  结合位点

Analysis on the specific combination of the binding target site and LexA protein in pseudomonas aeruginosa by the gel retardation experiments
CHEN Xuan,TANG Shao-hui,TANG Hui,CHA Qing-bin,LIU Fang.Analysis on the specific combination of the binding target site and LexA protein in pseudomonas aeruginosa by the gel retardation experiments[J].Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition),2008,29(4).
Authors:CHEN Xuan  TANG Shao-hui  TANG Hui  CHA Qing-bin  LIU Fang
Abstract:
Keywords:
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