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| 北京棒杆菌天冬氨酸激酶M372I-T379S双突变体的构建及其酶学性质 | |
| 作者姓名： | 高云娜 韩彩静 詹冬玲 方丽 闵伟红 |
| 作者单位： | 吉林农业大学 食品科学与工程学院, 长春 130118 |
| 摘 要： | 为构建高酶活力天冬氨酸激酶(aspartokinase, AK), 并削弱或解除Lys(lysine)反馈抑制作用突变体, 通过定点突变和高通量筛选技术构建突变体M372I,T379S和M372I-T379S, 对野生型（WT）和突变体分别进行诱导表达、 纯化及酶学性质表征. 结果表明： 突变体M372I,T379S和M372I-T379S AK与WTAK相比, Vmax分别提高了13.77,15.02,15.60倍, Km和n值均降低; 最适pH值分别升高为8.0,8.5,8.5, 且半衰期分别延长了1.0,0.9,2.3 h; M372I-T379S AK最适温度为30 ℃, 比WT AK高2 ℃; 当浓度为1~10 mmol/L时, 突变体均削弱或部分解除了抑制剂Lys的反馈抑制作用. |
| 关 键 词： | 天冬氨酸激酶 定点突变 酶动力学 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2018-12-04 |
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