CAR-baeillus亚单位rRNA基因分子克隆及斑点杂交方法的建立 |
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作者姓名: | 魏强 过正义 石原智明 伊藤丰志雄 |
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作者单位: | 中国医学科学院实验动物研究所,日本酪农学园大学实验动物研究所,日本实验动物中央研究所 |
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摘 要: | 用真细菌类亚单位rRNA中的保守片段序列合成引物,从小鼠来源的CAR-bacillusCBM株的基因组中用PCR方法扩增出其1.5Kb大小的基因片段,两端加尾dc和已加尾dG的PBR322质粒连接,转化入JM109菌中,在含有四环素的培养基中挑选克隆经氨苄青霉素筛选后,在LB基液中大量增殖,经溶菌酶裂解,提取重组质粒,经PSTI消化,得到1.5kb大小的插入菌段,经HindⅢ、HinfⅠ、ECORI(HaeⅢ)和xhoⅠ测定忠实性后,以此为模板,用非放射地高辛标记试剂盒合成探针,其灵敏性可达1.2pg,且特异性较强。
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关 键 词: | CAR-bacillusCBM株,斑点杂交 |
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