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籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达
引用本文:康海岐,申国安,杨金水,程在全. 籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达[J]. 中山大学学报(自然科学版), 2009, 48(1)
作者姓名:康海岐  申国安  杨金水  程在全
作者单位:1. 中国科学院昆明植物研究所,云南,昆明,650204;四川省农业科学院作物研究所,四川,成都,610066
2. 复旦大学遗传研究所,上海,200433
3. 中国科学院昆明植物研究所,云南,昆明,650204
基金项目:国家自然科学基金,四川省财政育种专项资助项目,四川省农科院青年基金 
摘    要:以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i (AY318757)开放阅读框(ORF),命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点.然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α[pQE30-Eqfr]重组克隆.再以其重组质粒转化M15[pREP-4]感受态细胞,筛选出M15[pQE30-Eqfr, pREP-4]重组克隆.通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1~3 h里表达量较高,之后表达量开始下降.用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础.

关 键 词:杂交籼稻  姊妹染色单体粘着蛋白  原核表达  载体构建

Vector Construction and Prokaryotic Expressing of OsRad21-i,a Novel Gene Coding Sister Chromatid Protein ofHybrid Indica Rice (Oryza Sativa ssp.indica)
KANG Haiqi,SHEN Guoan,YANG Jinshui,CHENG Zaiquan. Vector Construction and Prokaryotic Expressing of OsRad21-i,a Novel Gene Coding Sister Chromatid Protein ofHybrid Indica Rice (Oryza Sativa ssp.indica)[J]. Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni, 2009, 48(1)
Authors:KANG Haiqi  SHEN Guoan  YANG Jinshui  CHENG Zaiquan
Abstract:
Keywords:OsRad21-i
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