两种分子形式尿激酶直接水解苄氧羰-L-酪氨酸P-硝基酚酯(CTN)的化学动力学

(1) 以纤维蛋白溶酶原(PG)为底物,H—uk的Km值为L—uk的一半。但以CTN为底物时,H—uk和L—uk的Km值很接近,分别为5×10~(-4)M和4×10~(-4)M。 (2) 在PH7.5—9.0范围内,改变氢离子浓度只影响两种尿激酶水解CTN的最大反应速度V,而Km保持不变。由此断定k_(-1)>>k_2。Km是平衡常数的倒数。以pH对logV作图,求得H—uk和L—uk活性中心可解离基团的PK很接近,分别为7.65和7.85。 (3) ∈—氨基已酸(E-ACA)对两种尿激酶都呈现典型的竞争性抑制作用。EACA对H—uk的Ki为0.8×10~(-2)M,对L—uk的Ki为1.5×10~(-1)M。来源不同的天然胰蛋白酶抑制剂对两种尿激酶都不抑制。 (4) 观察了温度对K_m和k_2的影响,计算了平衡反应和活化过程的各种热力学常数。 (5) 从所得动力学和热力学结果推测,两种分子形式尿激酶的活性中心性质相同,但二者的构象却很不相同,H—uk的结构更有利于进行反应,由此推测H—uk是尿激酶的天然形式,L—uk是前者的降解产物。