| 锌指蛋白Zbed3的表达与分离纯化 |
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| 引用本文： | 王琳,童耕雷,邹永水.锌指蛋白Zbed3的表达与分离纯化[J].上海交通大学学报,2011,45(1):0092-0095. |
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| 作者姓名： | 王琳 童耕雷 邹永水 |
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| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所结构生物学客座实验室） |
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| 摘 要： | 将编码小鼠锌指蛋白Zbed3的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28c,构建了含组氨酸标签的表达质粒pET28c-Zbed3,并将其转入大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP;在20℃条件下,采用100μmol/L的异丙基硫代--βD半乳糖苷(IPTG)诱导、培养20 h而获得含Zbed3的菌体;菌体裂解液经超滤浓缩后采用镍(螯合)柱分离纯化得到锌指蛋白Zbed3(浓度达60 mg/L);同时,采用30%醋酸溶解包涵体,用0.5 mol/L的Tris-HCl(pH=8.8)缓冲液中和而使Zbed3在生理pH环境中复性.结果表明,Zbed3复性后在离心上清液中的回收率达到80%,其复性蛋白质与表达产物为可溶性(天然态)Zbed3的圆二色性光谱特征相一致,以此验证了复性后Zbed3空间构象的正确性.
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| 关 键 词： | 锌指蛋白Zbed3 表达 包涵体 纯化 圆二色性光谱 |
| 收稿时间： | 2010-1-7 |
Expression and Purification of Mouse Zbed3 Protein in Escherichia coli |
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| WANG Lin,TONG Geng-lei,ZOU Yong-shui.Expression and Purification of Mouse Zbed3 Protein in Escherichia coli[J].Journal of Shanghai Jiaotong University,2011,45(1):0092-0095. |
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| Authors: | WANG Lin TONG Geng-lei ZOU Yong-shui |
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| Institution: | WANG Lin~1,TONG Geng-lei~1,ZOU Yong-shui~2(1.School of Life Science and Biotechnology,Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200240,China,2.Laboratory of Structural Biology with Visiting Scientists,Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institute for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences,Shanghai 200031,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Zbed3 protein expression inclusion body purification circular dichroism(CD) |
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