| 分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化 |
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| 引用本文： | 邓长江,刘向勇,鲍晓明. 分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化[J]. 山东大学学报(理学版), 2004, 39(5): 107-111 |
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| 作者姓名： | 邓长江 刘向勇 鲍晓明 |
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| 作者单位： | 山东大学,微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250010 |
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| 摘 要： | 通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断，将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中，构建了重组表达质粒pPICgK／rPA，转化Pichia pastoris GS115宿主菌．通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况，筛选His^ Mut^s表型转化子．并在2．0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10，GR11．摇瓶培养，甲醇诱导外源基因表达，表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明重组蛋白分子量约39ku，能与特异性单克隆抗体发生免疫反应；体外气泡法测定rPA活性，结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性．通过正交试验，优化发酵条件，表达活性最高为1050IU／mL．
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| 关 键 词： | 组织型纤溶酶原激活剂突变体 毕赤酵母 分泌表达 发酵条件 |
| 文章编号： | 1671-9352(2001)05-0107-05 |
| 修稿时间： | 2004-04-05 |
The secretive expression of reteplase in Pichia pastoris and optimization of its fermentation conditions |
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| DENG Chang-jiang,LIU Xiang-yong , BAO Xiao-ming. The secretive expression of reteplase in Pichia pastoris and optimization of its fermentation conditions[J]. Journal of Shandong University, 2004, 39(5): 107-111 |
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| Authors: | DENG Chang-jiang LIU Xiang-yong & BAO Xiao-ming |
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| Affiliation: | DENG Chang-jiang,LIU Xiang-yong & BAO Xiao-ming * |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | reteplase (rPA) Pichia pastoris secreted expression fermentation |
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