| 由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒 |
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| 引用本文： | 聂玉春,陈建国,丁明孝.由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒[J].科学通报,2003,48(10):1059-1063. |
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| 作者姓名： | 聂玉春 陈建国 丁明孝 |
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| 作者单位： | 北京大学生命科学学院细胞生物学与遗传学系,北京,100871 |
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| 基金项目： | 本工作为国家重点基础研究发展规划(批准号: G1999011904)、国家自然科学基金(批准号: 30170041)和高等院校博士点基金资助项目. |
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| 摘 要： | 通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序. 与已知其他几株CSFV代表毒株F114, Brescia, Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基酸同源性分别为99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA, 插入pMC18质粒SalⅠ/ XbaⅠ之间, 得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297. 用T7 RNA聚合酶进行体外转录, 转录出的RNA转染PK-15细胞, 细胞上清液经扩增后, 测定上清液中病毒滴度. 质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似. 将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置, 获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2, 体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2. 两种嵌合体病毒均能感染PK-15, SK-6和原代猪睾丸细胞, 间接免疫荧光检测显示较vM12297弱, 在PK-15细胞上滴度达到8×10 F-PFU/mL. 这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 全长cDNA克隆 感染性RNA 转染 体外转录 |
| 收稿时间： | 2003-01-08 |
| 修稿时间： | 2003年1月8日 |
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