| 截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 田江红. 截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定[J]. 科学技术与工程, 2010, 10(4) |
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| 作者姓名： | 田江红 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部微生物学教研室,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30600564、30670100、30700710、3070030)资助 |
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| 摘 要： | 为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清。说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体。
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| 关 键 词： | HCV NS5B RNA聚合酶 大肠杆菌 蛋白表达 |
| 收稿时间： | 2009-10-30 |
| 修稿时间： | 2009-10-30 |
Expression, Purification and Indentification of the Truncated HCV NS5B RNA Polymerase in the E. coli |
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| tianjianghong. Expression, Purification and Indentification of the Truncated HCV NS5B RNA Polymerase in the E. coli[J]. Science Technology and Engineering, 2010, 10(4) |
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| Authors: | tianjianghong |
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| Affiliation: | U|¨;Department of Microbiology/a>;Fourth Military Medical University/a>;Xi' an 710032/a>;P.R.China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hepatitis C virus NS5B RNA polymerase E.coil protein expression |
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