鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立鸽圆环病毒(PiCV)TaqMan探针荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。方法 通过比对NCBI发表的PiCV各分离株序列，选取其polymerase基因保守序列设计引物探针，建立PiCV的荧光定量PCR方法，对方法的特异性及敏感性进行验证；取浓度为3.48×10⁵和3.48×10⁴copies/μL的质粒标准品，每个浓度做6个平行，重复检测3次，计算组内和组间变异系数，验证方法的重复性和稳定性；用该方法检测采自北京某养殖场的鸽肝、脾、肺、法式囊样本各40份及鸽盲肠样本36份，以验证此方法在实际应用中的检测能力。结果 建立的PiCV荧光定量PCR方法在3.48×10⁷～3.48×10¹ copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系，标准曲线Slope为-3.381,R²值为1,扩增效率为97.61%。可检测到的PiCV最低浓度为34.8 copies/μL,与常规PCR法相比，检测灵敏度高2个数量级；以猪圆环病毒2型、禽腺病毒I型及III型、禽白血病病毒、禽网状...