| 建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法 |
| |
| 引用本文： | 祝静静,鲍秋颖,王宇萌,夏钢.建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法[J].华东师范大学学报(自然科学版),2012,2012(5):45-53,84. |
| |
| 作者姓名： | 祝静静 鲍秋颖 王宇萌 夏钢 |
| |
| 作者单位： | 华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室、上海市脑功能基因组学重点实验室,上海,200062 |
| |
| 基金项目： | 上海市浦江人才计划(08PJ1404100) |
| |
| 摘 要： | 运用PCR的方法，从萤火虫萤光素酶基因载体 pGL4.26 扩增萤火虫萤光素酶基因片段，将其插入连接于原核表达载体pET24a 中，构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后，将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21（DE3） 中，获得阳性重组菌BL21/pET24a-Luc.IPTG诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶.该目的蛋白活性用Bright-GloTM试剂进行验证并用于建立一种基于测量ATP含量的检测细胞生物活性的方法.与传统的细胞生物活性检测试剂盒MTT，CCK-8以及Alamar Blue比较，该方法具有反应迅速、活力高、灵敏度好、生产方便的优点，具有实际应用的潜力.
|
| 关 键 词： | 萤火虫萤光素酶 蛋白表达 蛋白纯化 细胞活性 |
| 收稿时间： | 2011-06-01 |
Development of a luciferase-based method for rapid cell viability detection |
| |
| ZHU Jing-jing
,
BAO Qiu-ying
,
WANG Yu-meng
,
XIA Gang.Development of a luciferase-based method for rapid cell viability detection[J].Journal of East China Normal University(Natural Science),2012,2012(5):45-53,84. |
| |
| Authors: | ZHU Jing-jing BAO Qiu-ying WANG Yu-meng XIA Gang |
| |
| Institution: | (Key Laboratory of Brain Functional Genomics,Ministry of Education,Shanghai Key Laboratory of Brain Functional Genomics.East China Normal University,Shanghai 200062,China) |
| |
| Abstract: | The firefly luciferase gene was PCR-amplified from plasmid pGL4.26 and subcloned into a bacterial overexpression vector pET24a.Expressed luciferase fusion protein was purified using Ni-NTA affinity chromatograph and its activity was confirmed using Bright-GloTM kit. Based on the ATP-dependency of luciferase reaction,we developed a cell viability assay,which is faster,more convenient,and more sensitive in detect cell viability than generally used MTT, CCK-8 and Alamar Blue methods. |
| |
| Keywords: | firefly luciferase protein expression protein purification cell viability assay |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《华东师范大学学报(自然科学版)》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《华东师范大学学报(自然科学版)》下载免费的PDF全文 |
