| 基于理性设计的烟酰胺核糖激酶活性提升及应用 |
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| 引用本文： | 李巧峰,童卫民,王润玲.基于理性设计的烟酰胺核糖激酶活性提升及应用[J].云南民族大学学报(自然科学版),2023(2):175-182. |
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| 作者姓名： | 李巧峰 童卫民 王润玲 |
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| 作者单位： | 1. 天津医科大学药学院;2. 北京红惠新医药科技有限公司 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(21706012)；;中国博士后科学基金(2022-ZZ-025)； |
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| 摘 要： | 烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN)是NAD+的前体，补充NMN可有效恢复体内NAD+水平，并改善与NAD+下降相关的病理状态和疾病.目前NMN主要通过酶法生产，但是酶的催化活性较低，使得酶法合成NMN的成本仍然较高.来源于人的烟酰胺核糖激酶NRK1可以催化ATP和烟酰胺核糖合成NMN,因此，以提升烟酰胺核糖激酶NRK1的催化活性为目的，利用理性设计的策略和定点突变技术，通过氨基酸序列比对和结构分析，设计了NRK1的2个突变体NRK1(T47V)和NRK1(N62D),并在大肠杆菌中成功表达.实验表征发现，二者的催化特性均得到了提升，且NRK1(T47V)具有更好的催化特性，其活性较NRK1提高130%,催化效率kcat/Km和稳定性分别较NRK1提高了100%和20%.在较大反应体系中反应100 min时，NRK1(T47V)催化底物烟酰胺核糖的转化率为78%,较NRK1提高15.4%,产物NMN的产量为4.13 g/L,较NRK...
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| 关 键 词： | 烟酰胺核糖激酶 理性设计 定点突变 活性 烟酰胺单核苷酸(NMN) |
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