| 表达EGFR与HER2双抗体融合蛋白腺病毒载体研究 |
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| 引用本文： | 侯兵,钱其军,金华君,范丽.表达EGFR与HER2双抗体融合蛋白腺病毒载体研究[J].科学技术与工程,2011,11(10). |
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| 作者姓名： | 侯兵 钱其军 金华君 范丽 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长海医院门诊部体检中心,上海,200433
2. 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海,200438 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)重点项目 |
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| 摘 要： | 构建携带Cetuximab全长抗体与Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)融合蛋白的腺病毒,探讨其在体外表达情况,及其与EGFR和HER2的结合能力.通过PCR,将抗体cetuximab基因与编码Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)的序列融合,构建携带西妥昔单抗全长基因与Herin融合基因的腺病毒穿梭载体pDC339-AT2一Herin,并在293细胞内包装成重组病毒Ad5-AT2-Herin.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Ad5-AT2-Herin表达全长抗体融合蛋白的体外表达量;应用Western印迹法检测所表达全长抗体轻重链的完整性及均衡性;应用间接免疫荧光法(IFA)检测所表达的融合蛋白与EGFR(+)Her2(-)的A431细胞,以及EGFR(-)Her2(+)的SK-OV-3细胞膜结合的特异性.ELISA检测分析表明,AdS-AT2-Herin在293细胞中的表达量为209.3 ng/mL-317.3 ng/mL;Western blot显示轻重链表达平衡,大小符合预期;间接免疫荧光(IFA)显示腺病毒表达的融合蛋白与A431细胞表面受体EGFR及SK-OV-3细胞表面受体Her2均能特异性结合.成功构建携带EGFR和HER2双特异性抗体基因的腺病毒载体Ad5-AT2-Herin,该载体在体外能高效表达双特异性抗体蛋白AT2-Herin,而且AT2-Herin蛋白能在体外与EGFR和HER2特异结合.
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| 关 键 词： | cetuximab Herstatin 融合蛋白 腺病毒载体 |
The Study of Adenovirus Mediated Biospecific Antibody Fusion Protein Targeting to EGFR and HER2 |
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| HOU Bing,QIN Qi-jun,JIN Hua-jun,FAN Li.The Study of Adenovirus Mediated Biospecific Antibody Fusion Protein Targeting to EGFR and HER2[J].Science Technology and Engineering,2011,11(10). |
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| Authors: | HOU Bing QIN Qi-jun JIN Hua-jun FAN Li |
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