拟南芥（Arabidopsis thaliana）miR396分子对类神经酰胺酶基因表达的负调控

以拟南芥（Arabidopsis thaliana）miR396小分子为研究对象，分别克隆到了miR396小分子的两个前体（MIR396n，MJR3966），得到转基因植株后，通过Microarray分析、Northern杂交以及遗传学分析的方法探讨了miR396与拟南芥类神经酰胺酶基因的关系。对miR396高表达转基因植株进行Microarray分析的结果表明，拟南芥类神经酰胺酶基因（Atceramidase-likel，Atceramidase-like2）在miR396高表达转基因植株中的表达与空载体转基因植株相比下降2倍以上，而4-alpha-乳糖基神经酰胺半乳糖转移酶则增加2倍以上。Northern杂交结果进一步验证了Microarray分析的结果，即在miR396高表达转基因植株中，拟南芥类神经酰胺酶基因的成员Atceramidase-likel和Atceramidase-like2表达水平均显著降低（分别减少6．8倍和2倍以上），而Atceramidase-like3的表达水平在35S：MIR396a转基因植株叶中有所下降，在35S：MIR396b转基因植株叶中变化不明显。相反地，在35S：MIR396a和35S：MIR396b转基因植株叶中，miR396表达水平分别比空载体转基因植株增加2倍以上。上述研究结果说明拟南芥miR396能有效地负调控Ceramidase-likel和Ceramidase-like2等基因的表达水平。