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| 重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化与鉴定 | |
| 摘 要： | 采用大肠杆菌作为宿主表达重组人胸腺肽α1(rhTα1)融合蛋白,纯化获得rhTα1并对其鉴定.于300L发酵罐进行中试发酵表达rhTα1融合蛋白;经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,离心发酵液收集菌体,菌体经破碎、离心、亲和层析捕获,获得融合蛋白;每升发酵液可获得约170 mg硫氧环蛋白-胸腺肽α1融合蛋白.融合蛋白经肠激酶酶切后,再经亲和层析、反相层析、体积排阻层析等纯化步骤,获得高纯度rhTα1;通过本纯化工艺获得的rhTα1原液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效液相色谱-排阻法(HPLC-SEC)的检测纯度均大于99%;采用玫瑰花环形成率测定rhTα1活性与市售化学合成标准品一致;质谱分析分子质量为3 066.59u,与去乙酰化的rhTα1理论分子质量(3 066u)一致;N端测序结果与理论值一致.综上结果,说明本工艺可实现工业化规模生产. |
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