特异性核糖体基因区打靶载体介导CDUPRT治疗肝癌的体内外研究 |
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作者姓名: | 王丽娜 薛志刚 李卓 薛金锋 刘雄昊 潘乾 龙志高 蔡芳 邬玲阡 戴和平 夏昆 梁德生 夏家辉 |
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作者单位: | 中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078;中南大学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078 |
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基金项目: | 致谢 本工作为国家自然科学基金(批准号:30500302)、国家重点基础研究发展计划(批准号:2004CB518800)和国家高技术研究发展计划(批准号:2002AA227012)资助项目. |
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摘 要: | 核糖体基因区打靶载体pHrn是本室构建的人源基因载体之一, 为探讨其在肝癌基因治疗的作用, 本研究构建了pHr-CeTpCDUPRT/GFP质粒载体并进行了肝癌的体内外治疗实验研究. 该质粒载体以pHrn载体为骨架, CMV+hTERT启动子作为转录调控元件, CDUPRT/GFP自杀融合基因为目的基因. 体外转染肝癌细胞BEL7402后, 流式细胞仪检测转染效率为30%~50%; RT-PCR和Western blotting结果表明, 有CDUPRT表达; HPLC检测5-FC可转化为5-FU, 给药后12 h 5-FU浓度达60.15 μg/mL; 四唑盐(Methylthiazolyl tetrazolium, MTT)分析结果显示, 200~800 μg/mL 5-FC使BEL7402的平均存活率为60%~35%. 同时, 对裸鼠肝癌模型进行瘤内转染, 结果显示, 当持续注射质粒和前体药物治疗时, 裸鼠肿瘤生长明显被抑制, 甚至体积稍有缩小; RT-PCR检测结果表明, 瘤内有CDUPRT表达; HPLC检测裸鼠血清中的5-FU浓度为7.694 μg/mL; 肿瘤组织病理切片显示, 大量肿瘤细胞坏死. 这些结果为实际应用此载体进行肝癌基因治疗提供了重要的实验依据.
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关 键 词: | 人源基因载体 增强子 hTERT启动子 自杀基因 肝癌 基因治疗 |
收稿时间: | 2006-04-24 |
修稿时间: | 2006-04-242006-07-17 |
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