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| 扁豆几丁质酶基因的克隆及表达 | |
| 作者姓名： | 陈增 叶秀云 李仁宽 冯爱华 林娟 杨捷 |
| 作者单位： | 福州大学生物科学与工程学院;福州大学酶高效表达国家工程实验室 |
| 基金项目： | 福建省自然科学基金资助项目(2011J05078);福建省教育厅科研资助项目(JA10023);福州大学科技发展基金资助项目(2010-XQ-20) |
| 摘 要： | 以扁豆总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增到长度为885 bp的扁豆几丁质酶基因cDNA,其编码294个氨基酸,目的蛋白的分子量为28.429 kDa.以该基因构建pET-21a-chi表达载体并在E.coli BL21(DE3)中表达.30℃下,用0.1 mmol.L-1IPTG,诱导5 h,表达产物的酶活力为36.25 U.mL-1.通过常压Sephadex G-50凝胶过滤色谱,DEAE-650C常压与高效离子交换色谱对表达产物进行纯化.目标蛋白达到电泳纯(SDS电泳一条带),几丁质酶的比活力108.42 U.mg-1.表达的蛋白质产物主要以可溶性形式存在. |
| 关 键 词： | 扁豆 几丁质酶基因 克隆 表达 纯化 |
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