| 一种快捷有效的构建cDNA文库的方法 |
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| 引用本文： | 徐远峰,黄文峰,高艳梅,翟金玲,黄惜. 一种快捷有效的构建cDNA文库的方法[J]. 贵州科学, 2009, 27(3): 71-75 |
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| 作者姓名： | 徐远峰 黄文峰 高艳梅 翟金玲 黄惜 |
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| 作者单位： | 海南大学农学院生物科学技术研究所,海南海口,570228;中国热带农业科学院橡胶栽培研究所,海南儋州,571737 |
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| 基金项目： | 海南省教育厅高校科研指导性项目,热带作物栽培生理学重点开放实验室开放课题基金项目,海南省耐盐作物生物技术重点实验室开放基金项目资助 |
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| 摘 要： | 构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段,传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切位点的接头序列,通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端,然后与质粒连接构成文库。本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法。该方法的主要步骤包括：（1）通过反转录合成cDNA第一条链,通过置换底物的方式在cDNA3’末端合成接头序列。（2）利用cDNA两端的接头引物,通过TaqDNA合成酶PER扩增合成cDNA第二条链。（3）将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接。（4）将连接物转化大肠杆菌,得到cDNA文库。利用本方法,我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库。PCR结果显示插入的片段分布在O．5～3．0kb之间,大部分cDNA的长度在500—1000bp之间,表明cDNA具有较好的完整性。本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA模板需要量少的特点,而且适用于任何高等生物RNA样品。
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| 关 键 词： | 红海榄 cDNA文库 T-载体 |
A Rapid and Efficient Method for Construction of cDNA Library |
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| XU YUAN-feng,HUANG Wen-feng,GAO Yan-mei,ZHAI Jin-ling,HUANG Xi. A Rapid and Efficient Method for Construction of cDNA Library[J]. Guizhou Science, 2009, 27(3): 71-75 |
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| Authors: | XU YUAN-feng HUANG Wen-feng GAO Yan-mei ZHAI Jin-ling HUANG Xi |
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