摘 要: | Mitochondrial Ca~(2+)Uniporter(MCU)作为细胞钙离子通道uniporter复合物的重要组分发挥了关键作用.近期研究发现将盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)DdMCU重构于酵母系统进一步证明了MCU是线粒体正常发挥uniporter性的最基本原件.为了深入研究DdMCU结构与功能,本研究通过合成盘基网柄菌的MCU基因,利用PCR得到目的DNA片段,克隆到表达载体pPICZX,构建DdMCU-GFP融合蛋白表达质粒pPICZX-DdMCU.重组质粒转化酵母X33,经博莱霉素梯度筛选,得到8个酵母重组子,且PCR检测目的基因已与酵母基因组整合成功.酵母重组子进行甲醇诱导表达,经激光共聚焦显微镜与western检测,均表明蛋白已成功表达.
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