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杂志ISSN号
定点突变提高豆豉纤溶酶的酶活力和底物特异性的研究
作者姓名:
崔堂兵
郭勇
罗文华
舒薇
作者单位:
1. 华南理工大学生物科学与工程学院,广州,510640
2. 华南农业大学分析测试中心,广州,510640
摘 要:
以pBE—DFE质粒为模板,采用反向长距离PCR技术对豆豉纤溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme,DFE)基因进行定点突变,使位于酶的底物结合区第156位的谷氨酸和第166位的甘氨酸分别替换为丝氨酸和丙氨酸,使临近酶的底物结合区的第169位甘氨酸残基替换为丙氨酸,获得了三个突变体E156S,G166A和G169A.将含突变基因的表达载体转化枯草杆菌WB800,构建了豆豉纤溶酶基因突变体的表达菌株WB800(E156S);WB800(G166A)和WB800(G166A).将3种表达菌株进行液体发酵培养,结果发现发酵上清液中纤溶酶的纤溶活性为460,790和900U/mL,分别是未突变酶活性(660U/mL)的70%,115%和136%;3种突变酶对合成底物的H-D-Val-Leu-Lys-pNA的酰胺水解活性是未突变酶的17%,125%和121%.
关 键 词:
豆豉纤溶酶
定点突变
酶活力
特异性
定点突变
豆豉纤溶酶
酶活力
底物特异性
水解活性
酰胺
合成
酶活性
纤溶活性
上清液
液体发酵培养
发现
结果
菌株
表达载体
基因突变体
枯草杆菌
转化
突变基因
残基
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