| 重排NAD+合成途径提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性 |
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| 引用本文： | 润顺琪,李会玉,田平芳.重排NAD+合成途径提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性[J].北京化工大学学报(自然科学版),2015,42(4). |
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| 作者姓名： | 润顺琪 李会玉 田平芳 |
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| 作者单位： | 北京化工大学生命科学与技术学院北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029;北京化工大学生命科学与技术学院北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029;北京化工大学生命科学与技术学院北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家重点基础研究发展计划（973计划） |
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| 摘 要： | 为提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的催化活性,构建了两个载体分别表达:(1)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC);(2)与NAD+合成相关的关键酶,包括烟酸转磷酸核糖激酶(pnc B)、烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶(nad D)和NAD+合成酶(nad E)。将这两个载体共转化大肠杆菌,获得重组菌E.coli(p ET-pepcp UC-pnc B-nad D-nad E)。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示这些酶均实现了高表达。摇瓶发酵显示,与单独过表达PEPC的重组菌相比,双质粒工程菌的PEPC酶活提高了4.36倍;与野生型大肠杆菌相比,双质粒工程菌的琥珀酸产量提高了4.23倍,达到0.9 g/L,富马酸产量提高了5.23倍,达到5.4 mg/L。上述结果表明加强NAD+合成途径提高了PEPC活性,并增加了还原三羧酸循环的代谢流量。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 NAD+ 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 琥珀酸 富马酸 |
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