不同来源葡萄糖氧化酶的分离纯化及其生物催化特性 |
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引用本文: | 王文婷,赵伟,章魁普,黎亮,郭美锦.不同来源葡萄糖氧化酶的分离纯化及其生物催化特性[J].华东理工大学学报(自然科学版),2016(4):484-491. |
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作者姓名: | 王文婷 赵伟 章魁普 黎亮 郭美锦 |
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作者单位: | 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;山东福洋生物科技有限公司 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展(863)计划(2014AA021705) |
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摘 要: | 采用离子交换层析法对4种不同来源的葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOD,EC 1.1.3.4)进行分离纯化,纯化后酶的相对分子质量约为130kDu,为双亚基酶。纯化后的4种酶的酶学性质相对稳定,对pH有较宽的响应范围。温度为20~50℃时,随着温度的升高酶活降低且稳定性较好;温度为55℃时稳定性较差;而在60℃时则失活。金属离子如Fe2+、Co2+、Mg2+和Cu2+对4种酶都有较强的抑制作用,Fe2+的抑制尤其明显,而螯合剂EDTA可以激活酶的活性。在30℃、pH为7.0的条件下,以不同浓度(20~100mmol/L)的葡萄糖为底物分别测定4种酶的米氏常数(Km)和催化常数(Kcat)。通过光谱和色谱对4种葡萄糖氧化酶进行检测,虽然氨基酸组成有明显不同,但二维结构基本一致,而GOD前体goxC和修饰蛋白如过氧化氢酶、过氧化氢酶前体和Pc16g04630等可能是提高GOD催化效率和工业应用的分子基础。
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关 键 词: | 葡萄糖氧化酶 纯化 生物催化特性 氨基酸序列分析 |
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