| 对虾白斑综合征病毒结构蛋白基因vp95表达时序分析及其抗体的制备 |
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| 引用本文： | 高美玲,徐丽美,李钫,杨丰.对虾白斑综合征病毒结构蛋白基因vp95表达时序分析及其抗体的制备[J].厦门大学学报(自然科学版),2014(1). |
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| 作者姓名： | 高美玲 徐丽美 李钫 杨丰 |
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| 作者单位： | 厦门大学海洋与地球学院;国家海洋局第三海洋研究所;海洋生物遗传资源重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31072243) |
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| 摘 要： | 对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是造成养殖对虾病害的主要病原,其300kb的双链环状DNA基因组共编码532个开放阅读框(open reading frames,ORF).蛋白VP95是WSSV的结构蛋白,在病毒囊膜蛋白和核衣壳中均有分布,由ORF wsv442编码,基因全长2 400bp.首先对基因vp95的表达时序进行分析,证明该基因属于晚期基因.为了更深入地研究该结构蛋白的功能,选择中间编码200个氨基酸的片段(1 051~1 650nt)进行克隆表达.此片段被克隆到pET-His载体上,构建好的质粒转化入表达菌株大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21(DE3),经IPTG诱导后,收集细菌,超声破碎后,将含有可溶性表达重组蛋白的上清用Ni 2+-NTA agaros纯化.纯化的重组蛋白HisVP95-M200免疫小鼠,制备抗血清.为了去除血清中的杂质,用HiTrap NHS-activated HP(GE Healthcare)亲和层析纯化柱子纯化血清中抗蛋白VP95的抗体.Western blot分析显示,未纯化的血清和纯化的抗体对病毒粒子中蛋白VP95都有很高的效价,并且具有严格的专一性.为进一步研究VP95蛋白在病毒粒子的包装中的作用,以及其在病毒的入侵过程中的功能奠定了良好的基础.
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| 关 键 词： | 对虾白斑综合征病毒 VP 转录分析 多克隆抗体 |
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