| 摘 要： | 为了观察Wnt联合BMP诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化是否具有协同作用,本研究以密度梯度离心联合贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞;实验分组为:对照组、Wnt组、BMP-7组、Wnt和BMP-7联合诱导组;以CCK-8法检测细胞的增殖活性;定量测定碱性磷酸酶(ALP)活性;以RT-PCR技术检测特异成骨转录因子的表达情况;使Von Kossa染色法观察细胞内矿化沉积程度。结果显示:以CKK-8法测培养第7天时联合组吸光度值为0.847,Wnt组为0.739,均明显高于对照组0.408,差异具有显著性(P0.05);联合诱导组的ALP活性比值在培养第6天和第12天时分别为63.9和144.4,BMP-7组分别为40.9和104.2,均明显高于对照组的7.2和18.8,差异具有统计学意义(P0.05);培养14 d后,OCN、β-Catenin的相对灰度值联合组高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05),而Runx2及Osterix的表达量各组间差异无统计学意义;培养3周后,以Von Kossa染色后观察到钙结节在大小和数量上联合组均大于对照组。由此可知,Wnt3a因子和BMP-7联合可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,且两者具有协同作用。
|
