改造细菌基因组的双重选择系统的构建

对细菌基因的敲除与回补可以用于基因功能的研究和基因组的改造。传统的Red同源重组敲除系统依赖于抗性标记基因的正向选择，无法实现基因回补菌株的选择。文章通过构建具有独特优势的双重选择系统，将2种选择标记基因tetA和sacB构建到一个自杀质粒中，该质粒含有tetA-sacB双基因盒，可以利用该双基因盒的双重选择作用实现细菌基因组中基因的敲除与回补。结果表明：在敲除大肠杆菌MG1655中的lacZ基因时，利用构建的双重选择系统中tetA的抗生素耐药性成功筛选到阳性克隆；利用双重选择系统的反向选择作用，在含有镰刀菌酸和蔗糖的培养基上进行筛选，实现了lacZ基因的回补。