| 植物NAD-IDH基因克隆及体外表达酶活力分析 |
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| 作者姓名： | 陈德富 陈喜文 |
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| 作者单位： | 南开大学生物化学与分子生物学系,天津,300071;南开大学生物化学与分子生物学系,天津,300071 |
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| 基金项目： | 本工作为教育部高等学校骨干教师资助计划(批准号: 教技司(00)65号)和留学回国人员科研启动基金(批准号: 教外司留2003-406)资助项目. |
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| 摘 要： | 植物NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)是一多功能酶. 以拟南芥生态型“Columbia gl1”及甘蓝型油菜三系“陕2A”, “陕2B”和“垦C1”的叶片为材料, 采用RT-PCR方法成功地从每种植物材料中分别克隆了3种NAD-IDH不同亚基基因. 同源性搜索发现, 来源于油菜的克隆基因是新基因. 将克隆基因的功能蛋白编码区整合到pMID1多克隆位点, 构建表达重组体, 均能在体外翻译系统中高效地表达出特异目的蛋白. 亚基0, 亚基1和亚基2基因转录本加入到含终浓度为36 μg/mL的二硫键异构酶的体外翻译系统, 体外表达产物中检测到NAD-IDH酶活力. 不同基因种类及转录本分子比的体外表达产物的酶比活力比较表明, NAD-IDH由3种亚基组成, 缺一不可, 缺少亚基0是致命的, 缺少亚基1或2中的任何一个对酶活力的损伤是严重的. 同时发现, 来源于陕2A和陕2B的亚基1基因转录本中存在碱基缺失现象, 从而发生移框突变或无义突变, 使突变亚基不表现正常亚基1功能, 导致油菜品系间叶片NAD-IDH酶比活力存在差异.
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| 关 键 词： | NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶 体外表达 小麦胚芽无细胞蛋白质合成系统 二硫键异构酶 甘蓝型油菜 |
| 收稿时间： | 2003-10-08 |
| 修稿时间： | 2003-12-29 |
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