| 东方百合ISSR-PCR反应体系的正交优化 |
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| 引用本文： | 丁信誉,邱帅,席梦利,施季森. 东方百合ISSR-PCR反应体系的正交优化[J]. 南京林业大学学报(自然科学版), 2012, 36(5): 42-46 |
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| 作者姓名： | 丁信誉 邱帅 席梦利 施季森 |
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| 作者单位： | 南京林业大学,林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室,江苏南京210037 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏高校优势学科建设工程资助项目 |
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| 摘 要： | 以东方百合‘Constanta’和‘Sorbonne’以及9份‘Constanta’בSorbonne’的F1代为试材,采用改良的CTAB法提取百合嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)对东方百合ISSR-PCR反应体系的Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs和引物5种因素在4个水平上进行优化试验,采用直观分析结合方差分析评价扩增结果。最终获得的最佳反应体系为:在20μL反应体系中,含Taq DNA聚合酶0.5μmol/min、Mg2+1.75 mmol/mL、模板DNA 40～100 ng、dNTPs 0.15 mmol/mL、引物0.6μmol/L、10×PCR Buffer 2μL,不足部分以ddH2O补足。在获得最佳反应体系的基础上采用单因素实验确定了引物最佳退火温度范围为55～45℃,最佳循环次数为30次以及延伸时间为1.5 min。应用该优化的反应体系,对‘Constanta’和‘Sorbonne’以及9份‘Constanta’בSor-bonne’的F1代DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的扩增稳定性。
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| 关 键 词： | 东方百合 ISSR-PCR 正交设计 |
Optimizing the ISSR-PCR reaction system for oriental lily based on orthogonal design |
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| DING Xinyu , QIU Shuai , XI Mengli , SHI Jisen. Optimizing the ISSR-PCR reaction system for oriental lily based on orthogonal design[J]. Journal of Nanjing Forestry University(Natural Sciences ), 2012, 36(5): 42-46 |
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| Authors: | DING Xinyu QIU Shuai XI Mengli SHI Jisen |
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| Affiliation: | (Key Laboratory of Forest Genetics and Biotechnology Ministry of Education,Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,China) |
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