虎鲸DHX36解旋酶表达纯化及酶学特性分析

通过生物化学、生物信息学、生物物理学等方法系统地对虎鲸(Orcinus orca)DHX36解旋酶的酶学特性进行了分析。借助原核表达系统,表达纯化得到纯度大于95%的OrcDHX36蛋白。利用荧光各向异性法对OrcDHX36的底物结合活性进行研究,结果表明OrcDHX36可以特异性识别并结合G4 DNA结构,但无法与ssDNA,dsDNA结合。通过停流光谱技术探索OrcDHX36解旋酶学特性,确定了其体外解旋的最适条件,明确了OrcDHX36的解旋方向为3′-5′。通过对比蛋白质信息数据库NCBI已公布的DHX36氨基酸序列,明确了大量DHX36蛋白(包括OrcDHX36在内)均无识别G4结构的RSM区;采用邻位法构建进化树,展示了OrcDHX36以及其他物种DHX36之间的亲缘关系。选择与OrcDHX36亲缘关系较远,且同样不具备RSM区的鸽子DHX36(ClDHX36),研究两者解旋活力特征,为揭示无RSM区的DHX36蛋白的G4解旋机制提供参考。