巴西苏木素致死膀胱癌靶标基因siRNA的筛选

课题组前期工作表明GADD45β和c-Fos在巴西苏木素(Brazilin)致死膀胱癌细胞T24时显著升高,且分别过表达GADD45β和c-Fos均能抑制T24细胞的生长,表明其为Brazilin致死T24细胞潜在的靶标基因,但并未在GADD45β和c-Fos沉默状态下研究Brazilin对T24细胞的影响。RNA干扰是目前沉默靶标基因的常用技术手段,但高效RNAi片段筛选步骤繁琐,成本高。在本文中,首先以GADD45β为例,设计仅需一步酶切连接就可获得的荧光报告载体p-GADD45β-EGFP-N1,对GADD45β的3条siRNA(siRNA360、siRNA477和siRNA638)在荧光显微镜下进行干扰效率的检测,获得的干扰效率分别为63%、34%和67%,表明siRNA638对GADD45β干扰效率最高,与RT-qPCR的筛选结果一致。为验证荧光报告载体的通用性,选择c-Fos构建荧光报告载体p-c-Fos-EGFPN1,通过筛选获得荧光量最少的c-Fos siRNA274组的干扰效率最高为64%,与RT-qPCR的验证结果一致。