| NF-κB相互作用多肽原核表达载体的构建、表达与纯化 |
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| 作者姓名： | 史海水 梁华平 徐祥 李生茂 |
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| 作者单位： | 1.河北医科大学,生物化学教研室,河北,石家庄,050017;第三军医大学,大坪医院野战外科研究所第一研究室,重庆,400042； 2.第三军医大学,大坪医院野战外科研究所第一研究室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划项目(G1999054203)，国家自然科学基金资助项目(30080000930200270)，全军“十五”课题基金项目(2001-2005) |
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| 摘 要： | 为了获得高纯度的可溶性NF-κB相互作用多肽,首先以酵母双杂交技术筛选获得的NF-κB相互作用多肽的酵母表达质粒pGAD GH/pp10为模板,扩增多肽基因片段,后经BglⅡ,StuⅠ双酶切后连接到pET-42a(+)载体中,构建GST/多肽融合蛋白的原核表达载体,并将GST/多肽融合蛋白的原核表达载体转化入BL-21菌株,用0.4 mmol/L IPTG于30 ℃诱导表达4 h,后经GST亲和纯化GST/多肽融合蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定融合蛋白的表达和纯度.实验结果表明,成功地构建了NF-κB相互作用多肽的GST/多肽融合蛋白原核表达载体,进行了GST/多肽融合蛋白的诱导表达,融合蛋白的表达为可溶性表达,最终纯化获得纯度约为80%的可溶性GST/多肽融合蛋白,这将为后继利用GST pull-down,Bio-sensor,EMSA等实验进一步验证NF-κB相互作用多肽的功能提供可靠的材料来源奠定基础.
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| 关 键 词： | NF-κB 多肽 蛋白表达 |
| 文章编号： | 1000-1565(2005)05-0530-05 |
| 修稿时间： | 2004-09-24 |
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