大肠杆菌BL21(DE3)氨基葡萄糖代谢调控相关基因的敲除及glmS在其中的表达研究 |
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引用本文: | 涂宇鹏,何京桦,乐科易,严维耀.大肠杆菌BL21(DE3)氨基葡萄糖代谢调控相关基因的敲除及glmS在其中的表达研究[J].复旦学报(自然科学版),2012,51(6). |
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作者姓名: | 涂宇鹏 何京桦 乐科易 严维耀 |
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作者单位: | 复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系,上海,200433 |
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摘 要: | 氨基葡萄糖(Glucosamine,GleN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖-磷酸转移酶系统操纵子(manXYZ)和乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)转运和代谢特异性系统操纵子(nagBACD-nagE)进行双剔除.随后构建含新型氨基葡萄糖合成酶基因(glmS)的表达载体pETG,并将它转化该双操纵子剔除菌株.结果表明,改造后的菌株不能以GleN或GlcNAc作为碳源进行代谢生长.表达GlmS菌株的上清液经Ni-NTA亲和层析纯化,其酶活性达8.63 U/mg,表明该菌株已具备发酵生产GleN的初步特性.
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关 键 词: | 大肠杆菌BL21(DE3) 氨基葡萄糖 λRed同源重组 氨基葡萄糖合成酶 代谢工程 |
A Preliminary Study of Key Regulated Enzymes Forglucosamine Metabolism in Escherichia coli BL21 (DE3) |
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