| 人白细胞介素32的真核表达、纯化及生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 张大为.人白细胞介素32的真核表达、纯化及生物学活性鉴定[J].四川大学学报(自然科学版),2009,46(6). |
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| 作者姓名： | 张大为 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院 |
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| 摘 要： | 摘要:目的：构建人白细胞介素32（IL-32）和IgG4基因Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC，建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞（CHO/DG44）克隆，并检测重组蛋白的表达及相应的生物学功能.方法：采用聚合酶链反应(PCR)从LPS激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32基因，并克隆到构建IL-32融合基因的真核表达载体 IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC.经脂质体法转染CHO/DG44 细胞, 通过RT-PCR检测，筛选出实验组细胞，并对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤（MTX）加压筛选，利用ProteinG-Agarose亲和纯化培养上清中表达的融合蛋白，并通过SDS-PAGE、免疫印迹鉴定检测目的蛋白的表达,最后以 HeLa细胞为靶细胞测定重组蛋白的生物学活性.结果：构建了一个IL-32融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC；筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc) 融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆; 亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在SDS-PAGE电泳后与预期分子质量大小相符，能够与羊抗人IgG-HRP 抗体特异结合,并能促进HeLa细胞的死亡.结论：成功构建了人IL-32融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC，获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc) 融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆.
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| 关 键 词： | IL-32-IgG4(Fc) 融合蛋白 真核表达 筛选 蛋白纯化 CHO/DG44细胞 |
| 收稿时间： | 9/23/2008 9:15:55 PM |
Expression, purification and biofunction al analysis of human IL-32 |
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| Zhang Da-Wei.Expression, purification and biofunction al analysis of human IL-32[J].Journal of Sichuan University (Natural Science Edition),2009,46(6). |
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| Authors: | Zhang Da-Wei |
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| Keywords: | IL-32-IgG4(Fc) fusion protein eukaryotic expression screening Protein purification CHO/DG44 cells |
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