| 摘 要： | 为了探讨mi R-200b是否通过靶向作用GNAQ基因并以此调控发情过程,本研究通过双荧光素酶报告基因系统,验证mi R-200b对靶基因GNAQ的真实干扰作用,并在下丘脑神经细胞和卵巢颗粒的细胞中过表达mi R-200b,用荧光定量PCR检测了GNAQ下游基因的表达变化。结果显示:共转染GNAQ-3'UTR-psi-CHECKTM-2和pri-mi R-200b-pc DNA3.1(+)组的hela细胞荧光素酶值是只转染psi-CHECKTM-2组的77.5%,其余两组与只转染psi CHECKTM-2组之间的差异无统计学意义。通过mi R-200b干扰载体转染下丘脑神经细胞,选择GNAQ下游基因ITPR、PRKCB、GNA1、CREB、MAP3K1、GPR54、KISS1及Gn RH进行实时荧光定量检测,结果发现:mi R-200b干扰组和对照组相比,GNAQ基因显著下调,下游ITPR、PRKCB、GNA1和MAP3K1、发情关键基因GPR54、KISS1和Gn RH显著上调。通过mi R-200b干扰载体转染卵巢颗粒细胞,选择GNAQ下游基因COMT、HSD3B1、CYP1A1和PKA基因进行表达量验证,结果表明:mi R-200b干扰后,GNAQ基因表达量升高,下游基因COMT、HSD3B1、CYP1A1和PKA表达量下降。由此推测,mi R-200b真实靶向调控GNAQ基因,进而调控发情过程。
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