核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响 |
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作者姓名: | 王二耀 于洋 李雪梅 焦丽红 王柳 |
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作者单位: | 1. 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室,北京,100080;中国科学院研究生院生物系,北京,100049 2. 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室,北京,100080 |
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基金项目: | 国家自然科学基金国际合作重点项目和国家自然科学基金面上项目(批准号:30300176,30400232) |
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摘 要: | 用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆, 成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠. 为探讨不同核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响, 用B6D2F1小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为供、受体进行核移植实验, 采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植, 并采用电脉冲、乙醇处理、氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4种不同方法对重构胚进行活化, 对克隆胚胎的体外及体内发育进行研究. 结果显示, 利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚胎的工作效率(49.7%). 乙醇、电脉冲和氯化锶3种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚, 但前二者处理的胚胎的囊胚发育率(52.4%, 54.2%)显著低于后者(76.9%). 10 mmol/L氯化锶处理6 h活化效果最好. 融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后, 囊胚发育率(9.5%, 8.6%)显著高于单纯电脉冲激活(2.6%), 而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段. 用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚的囊胚发育率最高(16.6%). 注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植, 都获得了发育到期的体细胞克隆小鼠, 发育到期率分别为 2.5%和1.4%. 结果表明, 两种核移植方法对B6D2F1 小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响, 用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠; 不同活化方法对重构胚胎的体外发育能力有显著影响, 在上述4种激活方式中, 氯化锶处理对克隆胚的激活效果最好.
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关 键 词: | 小鼠 体细胞克隆 核移植 显微操作 卵母细胞激活 发育 |
收稿时间: | 2006-09-06 |
修稿时间: | 2006-09-062006-11-03 |
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