| 扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定 |
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| 引用本文： | 邬敏辰,黄伟达,孙崇荣.扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定[J].江南大学学报(自然科学版),2001(4). |
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| 作者姓名： | 邬敏辰 黄伟达 孙崇荣 |
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| 作者单位： | 江南大学医学系 江苏无锡214063
(邬敏辰)，复旦大学生物化学系 上海200433
(黄伟达)，复旦大学生物化学系 上海200433(孙崇荣) |
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| 基金项目： | 国家“九五”科技攻关项目资助课题 (96 -C0 3 - 0 2 - 0 1 ) |
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| 摘 要： | 扩展青霉 (Pen .expansum)WMC2 0 718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤 ,其酶纯化了 18.5倍 ,获得了比活性为 4 2 0 0U mg的纯碱性脂肪酶 ,提取得率 4 8.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和高效反相色谱 (RP HPLC)检测 ,分别达到了SDS PAGE电泳纯和RP HPLC色谱纯。经SDS PAGE和SephadexG 15 0凝胶过滤色谱 ,分别测得酶的相对分子质量为 2 75 0 0和 2 82 0 0 ,表明该酶以单体形式存在。N末端 2 0个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为 30℃ ,在 35℃以下稳定 ,4 5℃处理 30min仅残留 30 %酶活性 ;pH稳定范围在 6 .5～ 10 .5之间 ,最适pH值为 10 .0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大 ,而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内 ,对脂肪酶的活性影响较小。
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| 关 键 词： | 扩展青霉 碱性脂肪酶 纯化与特性 N末端氨基酸序列 |
The Purification and N-Terminal Sequencing of the Lipase from Penicillium Expansum WMC20718 |
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| WU Min chen ,HUANG Wei da ,SUN Chong rong.The Purification and N-Terminal Sequencing of the Lipase from Penicillium Expansum WMC20718[J].Journal of Southern Yangtze University:Natural Science Edition,2001(4). |
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| Authors: | WU Min chen HUANG Wei da SUN Chong rong |
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| Institution: | WU Min chen 1,HUANG Wei da 2,SUN Chong rong 2 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | penicillium expansum alkaline lipase purification and characterization N terminal amino acid sequence |
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