KP-10对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及凋亡相关基因表达的作用研究

目的：探讨Kisspeptin-10(KP-10)对绵羊卵泡颗粒细胞(FGCs)CCND1、CDK6、Bcl-2、THBS1、TNC和Bax基因表达的影响.方法：将分离培养的原代FGCs细胞在含不同浓度(0、10、100和1 000 nmol/mL)KP-10培养基中培养，分别标记为CG组、EP-1组、EP-2组和EP-3组，采用CCK-8法检测FGCs的细胞活性，筛选出KP-10对FGCs增殖的最佳浓度与时间.采用RNA-seq技术进行转录组测序分析，应用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western Blot方法进行验证.结果：与CG组比较，48 h时EP-2组FGCs细胞活力极显著增强(P<0.01).转录组测序显示CG组和KP组间存在202个差异表达基因，其中上调基因119个，下调基因83个.qPCR和Western Blot结果表明，KP组CCND1、CDK6、Bcl-2基因表达显著上调(P<0.05);Bax、THBS1、TNC基因表达显著下调(P<0.01;P<0.05),与转录组测序结果基本一致.Western Blot验证结果与qPCR检测结果...