丙型肝炎病毒5′NCR转基因模型及在反义核酸物筛选和评价中的应用

为了进行以基因为靶的抗丙型肝炎病毒（HCV）药物的筛选及评价，将HCV5′NCR－C基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入pCI-neo表达载体，通过PCR扩增、酶切反应及荧光素酶瞬间表达活性鉴定，获得HCV5′NCR调控荧光素酶的稳定表达质粒pHCV-neo4，将其转染HepG2xleq,x G418筛选，从150个克隆中获得一个高荧光素酶活性表达的细胞株HepG2.9706。该株细胞内HCV片段的DNA及mRNA检测均呈阳性，转基因拷贝数为140。利用该细胞株，通过脂质体介导，对3条针对HCV调控基因的反义寡核苷酸（ASODNs)即HCV363，HCV349，HCV279进行了活性评价，结果显示，三种ASODNs均具有特异性的剂量依赖性抑制活性，浓度在0．5μmol/L时，三者对HCV5′NCR调控荧光素酶表达抑制率分别为61％，55％及48％。该研究提示反义寡核苷酸有可能成为治疗HCV的新途径。