| 丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立 |
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| 作者姓名： | 姚相杰 郭佳 郑从义 方呈祥 屈三甫 陈震球 李中红 李信墙 李卫云 |
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| 作者单位： | 武汉大学生命科学学院病毒学教育部重点实验室,武汉,430072;广州中海潮生物技术有限公司,广州,510010 |
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| 基金项目： | 本工作为国家高技术研究发展规划资助项目(批准号: 2002AA216031). |
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| 摘 要： | 以含有丙肝病毒全基因组cDNA的重组质粒(pHCV)为材料, 通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体, 建立了一种新的HCV体外细胞培养系统. 采用RT-PCR, 荧光定量RT-PCR, 链特异性RT-PCR, 免疫印迹, 免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率, 结果显示, 该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达, 并组装成直径约47 nm的HCV病毒体, 病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记; 该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL, 远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数, 也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度. 检测结果证明, 转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7, 并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体, 病毒滴度达106基因拷贝/mL.
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒(HCV) 全基因组 侵染性cDNA克隆 重组痘病毒 细胞培养体系 |
| 收稿时间： | 2004-01-08 |
| 修稿时间： | 2004-04-19 |
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