| 锌指蛋白ZNF191(243-368)G321A;N324L;G321A/N324L突变体的制备和表征 |
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| 引用本文： | 黄仲贤,汤李民,刘玉奇,谢毅,余龙.锌指蛋白ZNF191(243-368)G321A;N324L;G321A/N324L突变体的制备和表征[J].复旦学报(自然科学版),2003,42(6):846-850. |
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| 作者姓名： | 黄仲贤 汤李民 刘玉奇 谢毅 余龙 |
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| 作者单位： | 1. 复旦大学,化学系,化学生物学实验室,上海,200433
2. 复旦大学,生命科学学院,遗传学研究所,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(29671008) |
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| 摘 要： | 通过分子生物学的蛋白质工程方法对锌指蛋白ZNF191(243—368)的第三锌指区(Gly321和Asn324进行了定点突变，在大肠杆菌BL21中表达，通过DEAE52，CM23，肝素柱CL-6B纯化，最终获得了ZNF191(243—368)(G321A；N324L；G321A／N324L等3个突变体蛋白，运用凝胶电泳、UV光谱、EDTA滴定、金属离子(Co^2’，Ni^2 )取代等方法对突变体蛋白进行了初步表征，这为今后进一步研究该蛋白的结构和功能提供了必要的物质基础。
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| 关 键 词： | 锌指蛋白 ZNF191（243-368） 突变体 核酸结合蛋白 制备 表征 分子生物学 |
| 文章编号： | 0427-7104(2003)06-0846-05 |
Preparation and Characterization of Zinc Finger Protein ZNF191(243-368)'s Mutants |
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| HUANG Zhong-xian,TANG Li-min,LIU Yu-qi,XIE Yi,YU Long.Preparation and Characterization of Zinc Finger Protein ZNF191(243-368)''s Mutants[J].Journal of Fudan University(Natural Science),2003,42(6):846-850. |
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| Authors: | HUANG Zhong-xian TANG Li-min LIU Yu-qi XIE Yi YU Long |
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| Institution: | HUANG Zhong-xian~1,TANG Li-min~1,LIU Yu-qi~1,XIE Yi~2,YU Long~2 |
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| Abstract: | Several amino acid residues on the third finger of the zinc finger protein ZNF191(243-368) are mutated by four primer PCR method. These mutants are expressed in pTSA-18/E.coli BL21(DE3) system and purified through DEAE52, CM23, Heparin Sepharose CL-6B chromatographic colomns. The mutant proteins are characterized and studied by electrophoresis, Ultra-Visible spectrum, EDTA titration and Co~(2+), Ni~(2+) substitution. The results suggested that the mutations of the chosen amino acid residues do not affect the coordination between Zn~(2+) and cysteines of the protein. |
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| Keywords: | Zinc finger ZNF191(243-368) mutant |
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