| LC3真核表达载体构建及其在293T细胞中自噬诱导研究 |
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| 引用本文： | 游金,李游,施洁,卢洁,卢春花. LC3真核表达载体构建及其在293T细胞中自噬诱导研究[J]. 广西科学, 2018, 25(3): 313-317,324 |
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| 作者姓名： | 游金 李游 施洁 卢洁 卢春花 |
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| 作者单位： | 广西大学生命科学与技术学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81360324,81760500),广西自然科学基金项目(2017GXNSFAA198362)和广西高等教育本科教学改革工程项目(2017JGB130)资助 |
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| 摘 要： | 【目的】构建pEGFP-N1-LC3真核表达载体,并将其转染进人胚肾细胞293T,通过Earle's盐平衡液(Balanced salt solution,EBSS)饥饿诱导观察细胞自噬现象。【方法】RT-PCR扩增LC3基因,并将其插入pEGFP-N1真核表达载体构建重组质粒。将重组质粒转染至人胚肾细胞293T,显微镜观察、Western blot检测GFP-LC3融合蛋白表达情况。对转染细胞进行Earle's盐平衡液饥饿诱导,通过Western blot验证自噬指标,激光共聚焦显微镜观察自噬泡形成。【结果】成功构建pEGFP-N1-LC3真核表达载体,并在293T细胞中成功表达目的蛋白,在进行Earle's盐平衡液饥饿诱导后观察到自噬泡的形成,Western blot检测到LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化。【结论】本实验为研究自噬在癌细胞病理进程中的机制提供了实验素材。
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| 关 键 词： | LC3 细胞自噬 绿色荧光蛋白 人胚肾293T细胞 |
| 收稿时间： | 2018-04-12 |
Study on Construction of LC3 Eukaryotic Expression Vector and Its Autophagy Induction in 293T Cells |
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| YOU Jin,LI You,SHI Jie,LU Jie and LU Chunhua. Study on Construction of LC3 Eukaryotic Expression Vector and Its Autophagy Induction in 293T Cells[J]. Guangxi Sciences, 2018, 25(3): 313-317,324 |
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| Authors: | YOU Jin LI You SHI Jie LU Jie LU Chunhua |
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| Affiliation: | College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, Guangxi, 530005, China,College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, Guangxi, 530005, China,College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, Guangxi, 530005, China,College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, Guangxi, 530005, China and College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, Guangxi, 530005, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LC3 autophagy green fluorescent protein human embryonic kidney 293T cells |
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