| 表达EGFR与HER2双特异性抗体融合蛋白腺病毒载体的构建及表达 |
| |
| 引用本文： | 侯兵.表达EGFR与HER2双特异性抗体融合蛋白腺病毒载体的构建及表达[J].科学技术与工程,2011(10). |
| |
| 作者姓名： | 侯兵 |
| |
| 作者单位： | 第二军医大学长海医院 |
| |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划（863计划） |
| |
| 摘 要： | 目的：构建携带Cetuximab全长抗体与Herstatin C末端79个氨基酸（Herin）融合蛋白的腺病毒，探讨其在体外表达情况，及其与EGFR和HER2的结合能力。方法：通过合拉PCR，将抗体cetuximab基因与编码Herstatin C末端79个氨基酸（Herin）的序列融合，构建携带西妥昔单抗全长基因与Herin融合基因的腺病毒穿梭载体pDC339-AT2-Herin，并在293细胞内包装成重组病毒Ad5-AT2-Herin。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Ad5-AT2-Herin表达全长抗体融合蛋白的体外表达量；应用Western印迹法检测所表达全长抗体轻重链的完整性及均衡性；应用间接免疫荧光法（IFA）检测所表达的融合蛋白与EGFR( )Her2(-)的A431细胞，以及EGFR(-)Her2( )的SK-OV-3细胞膜结合的特异性。结果：ELISA检测分析表明，Ad5-AT2-Herin在293细胞中的表达量为209.3 ng/ml-317.3 ng/ml；Western blot显示轻重链表达平衡，大小符合预期；间接免疫荧光(IFA)显示腺病毒表达的融合蛋白与A431细胞表面受体EGFR及SK-OV-3细胞表面受体Her2均能特异性结合。 结论：成功构建携带EGFR和HER2双特异性抗体基因的腺病毒载体Ad5-AT2-Herin，该载体在体外能高效表达双特异性抗体蛋白AT2-HERIN，而且AT2-HERIN蛋白能在体外与EGFR和HER2特异结合。
|
| 关 键 词： | cetuximab Herstatin 双特异性融合蛋白 腺病毒载体 |
| 收稿时间： | 1/8/2011 8:22:16 PM |
| 修稿时间： | 2011/1/19 0:00:00 |
The Construction and Expression of Adenovirus mediated Biospecific antibody fusion protein targeting to EGFR and HER2 |
| |
| houbing.The Construction and Expression of Adenovirus mediated Biospecific antibody fusion protein targeting to EGFR and HER2[J].Science Technology and Engineering,2011(10). |
| |
| Authors: | houbing |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Cetuximab Herstatin Biospecific antibody protein Adenovirus |
|
| 点击此处可从《科学技术与工程》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《科学技术与工程》下载免费的PDF全文 |
