基于Nrf2/HO-1信号通路探讨补阳还五汤对AngⅡ诱导的H9c2细胞铁死亡的保护作用

目的 基于Nrf2/HO-1铁死亡信号通路探讨补阳还五汤对血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）诱导的H9c2大鼠心肌细胞铁死亡的影响。 方法 体外培养H9c2心肌细胞，分别设正常组（ZC）、模型组（MX）、补阳还五汤低剂量组（BD）、补阳还五汤中剂量组（BZ）、补阳还五汤高剂量组（BG）和阳性对照组（YX）。除正常组外，其余各组采用1μM血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）建立心肌细胞损伤模型，同时补阳还五汤低、中、高剂量组分别用含0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL补阳还五汤的培养基培养，阳性对照组使用含10μM铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）的培养基培养，24h后收集细胞。采用CCK-8法检测各组心肌细胞活性；细胞铁含量检测试剂盒测定细胞内铁含量；免疫荧光染色法检测各组Nrf2蛋白表达；q-PCR法检测各组细胞核转录相关因子2（Nrf2）、血红加氧酶-1（HO-1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的mRNA表达水平；ELISA试剂盒检测细胞谷胱甘肽（GSH）和GPX4的蛋白表达水平；Western blot法检测Nrf2和HO-1的蛋白表达。结果 补阳还五汤高剂量组可明显提高AngⅡ诱导的H9c2细胞活力下降，减少AngⅡ条件下铁含量（P﹤0.05）；与模型组相比，补阳还五汤高剂量组能显著逆转AngⅡ诱导的H9c2细胞GSH、GPX4、Nrf2和HO-1的基因和蛋白表达水平的下降，使AngⅡ条件下受到抑制的Nrf2表达增加，与阳性对照组结果一致。结论 补阳还五汤可能通过Nrf2/HO-1信号通路调控心肌细胞铁死亡从而保护高血压继发的心肌损伤。