构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达

目的：构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体（Fms—like tyrosine kinase 3 ligand，Fh3L）胞外域蛋白的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达。方法：依据Fh3L基因序列设计引物，以RT—PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Fh3L基因并构建其胞外域原核表达载体，测序鉴定后在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中诱导表达，用免疫印迹鉴定。结果：克隆到Flt3L编码区全长序列，经DNA测序证明与已报道的序列相同；构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体，转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21（ED3）中获得较高表达；免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量（Mr）为19000，与理论值相符，此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论：成功克隆Flt3L基因，构建其胞外域蛋白的原核表达载体，并在大肠杆菌中获得表达。