构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达 |
| |
作者姓名: | 卢宏松 徐丽慧 施焕敬 韩捷 何贤辉 |
| |
作者单位: | [1]暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心,广东广州510632 [2]暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所,广东广州510632 |
| |
摘 要: | 目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms—like tyrosine kinase 3 ligand,Fh3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Fh3L基因序列设计引物,以RT—PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Fh3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定。结果:克隆到Flt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论:成功克隆Flt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。
|
关 键 词: | FMS样酪氨酸激酶3配体 胞外域 原核表达 组氨酸标签 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |