| 重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定 |
| |
| 引用本文： | 李华,杨玲玲,杜红旗.重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定[J].河南大学学报(自然科学版),2019,49(3):311-317. |
| |
| 作者姓名： | 李华 杨玲玲 杜红旗 |
| |
| 作者单位： | 郑州工程技术学院化工食品学院,郑州,450044;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,郑州,450008 |
| |
| 摘 要： | Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.
|
| 关 键 词： | Tth 基因克隆 Ni2+柱 Thermus thermophilus 酶活 |
Cloning Expression and Activity Assaying of Recombinant Tth DNA Polymerase Gene |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
